食品中罌粟殼生物堿成分殘留量的測定 (LC-MS/MS法)
來源：博納艾杰爾
阿爾塔科技可提供以下標準品
產(chǎn)品號 | 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | CAS# |
1ST10087-100M | 可待因溶液，100ppm | Codeine Solution, 100ppm | 76-57-3 |
【事件背景】2016年1月晚，據(jù)新華網(wǎng)報道，近期國家食品藥品監(jiān)督管理總局在組織開展打擊食品違法添加執(zhí)法行動中，發(fā)現(xiàn)35家餐飲服務(wù)單位經(jīng)營的食品中含有罌粟堿、嗎啡、可待因、那可丁、蒂巴因等罌粟殼成分，存在涉嫌違法添加行為。
罌粟殼俗稱大煙，罌粟科植物罌粟的干燥果殼，含有嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因等20多種活性生物堿。這些生物堿具有一定的藥用價值，但其副作用亦不可低估。罌粟殼的生物堿能使人體產(chǎn)生快感，處于一種特殊的愉悅狀態(tài)，并逐漸產(chǎn)生依賴性進而成癮。不法分子正是利用這一點招攬回頭客，在食品中非法摻入罌粟殼或其粉碎物、浸提物，誘發(fā)食客上癮，具有潛在的吸食毒品的傾向，社會危害很大。
博納艾杰爾早在2014年已經(jīng)將成熟的“食品中罌粟殼生物堿成分殘留量的測定 (LC-MS/MS法)”方法編纂入《食品安全解決方案》，以供探討?？紤]到食品中香料成分的多樣性，而且這些香料也有可能給罌粟殼殘留成分的檢測帶來干擾。文中采用QuChERS-HPLC法建立一種快速、靈敏、特異的檢測方法定量測定罌粟殼的生物堿成分。
(1) 樣品提取
稱取2g試樣(精確至0.01g)于50mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入5mL水，混勻，加入15mL乙腈提取，再加入MS-MG5052提取管中提取，振蕩1 min后放入離心機中，離心1min(5000r/min)，取出后待凈化。
(2) 凈化
2.1 乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)凈化法
用1mL微量移液器將上述的上清液1mL移入MS-PA0252凈化管中，渦旋混合器渦旋1min，以5000r/min離心1min，移取上清液于進樣小瓶中。
2.2 C18小柱凈化法
吸取上述的上清液通過C18小柱，收集適量洗脫液至進樣器小瓶中。
在實際操作時，根據(jù)樣品中色素的含量選擇不同的凈化方式，每一凈化方法對應(yīng)各自的基質(zhì)空白和加樣樣品。
(3) 檢測條件
3.1 液相色譜條件
色譜柱：Venusil HILIC 色譜柱 2.1mm×100 mm，3μm
流動相： A：0.1%甲酸乙腈；B：100 mmol/L甲酸銨水溶液-乙腈(體積比為1：1，以甲酸調(diào)節(jié)pH=3.0)
流動相按表1進行梯度洗脫；流速：0.3mL/min；進樣體積：1μL。
表1 流動相的梯度洗脫程序(%):
時間(min) | 流動相A | 流動相B |
0.00～0.30 | 90 | 10 |
0.31～2.50 | 80 | 20 |
2.51～5.00 | 90 | 10 |
經(jīng)過對毛細管出口去簇電壓(DP)、碰撞池能量(CE)等質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化，最終確定嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因質(zhì)譜條件，見表2。3.2 質(zhì)譜條件
| 定量離子 | 定性離子 |
生物堿 | 去簇電壓(V) | 母離子相對分子質(zhì)量 | 相對分子質(zhì)量 | 碰撞能量(V) | 相對分子質(zhì)量 | 碰撞能量(V) |
那可丁 | 95 | 414.4 | 220.5 | 30 | 353.3 | 34 |
罌粟堿 | 92 | 340.4 | 202.2 | 38 | 171.1 | 49 |
蒂巴因 | 52 | 312.3 | 58.3 | 38 | 249.1 | 22 |
可待因 | 90 | 300.4 | 215.2 | 34 | 165.4 | 55 |
嗎啡 | 97 | 286 | 181.3 | 50 | 165.3 | 50 |
表2 嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因檢測的質(zhì)譜參數(shù):
(4) 結(jié)果:
圖1 從上至下分別為：重慶雞公褒醬樣品中嗎啡、罌粟堿、蒂巴因、可待因、那可丁的LC-MS-MS-MRM色譜圖:
4.1 線性范圍、回歸方程和檢出限:
表3 5 種罌粟殼生物堿成分LC-MS-MS 法的線性范圍、回歸方程和檢出限:
生物堿 | 線性范圍(ng/mL) | 回歸方程 | 相關(guān)系數(shù) | 檢出限(ng/mL) |
嗎啡 | 1～20 | y=1.61×103x＋431 | 0.9999 | 1.3 |
磷酸可待因 | 1～20 | y=4.75×103x＋0.409 | 0.9999 | 1.3 |
鹽酸罌粟堿 | 1～20 | y=1.18×105x＋1.17×105 | 0.9982 | 0.7 |
那可丁 | 1～20 | y=3.44×104x＋1.17×104 | 0.9992 | 0.7 |
蒂巴因 | 1～20 | y=6.68×104x＋3.82×104 | 0.9992 | 1.3 |
4.1 線性范圍、回歸方程和檢出限表3可見，在1～20ng/mL范圍內(nèi)，嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因在線性關(guān)系良好，r>0.999，檢出限分別為1.3ng/mL、1.3ng/mL、0.7ng/mL、0.7ng/mL、1.3ng/mL。
4.2 加標回收試驗
向沙茶醬(未檢出嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因)中分別加入低(20μg/kg)、中(50μg/kg)、高(100μg/kg)水平的嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因標準品進行加標回收試驗，結(jié)果見表4。
表4 火鍋食品中的罌粟殼生物堿成分殘留LC-MS-MS 法的加標回收試驗(n=6):
| 低水平加 | 中水平加 | 高水平加標 |
生物堿 | 平均回收率(%) | RSD(%) | 平均回收率(%) | RSD(%) | 平均回收率(%) | RSD(%) |
嗎啡 | 75.6 | 1.6 | 80.6 | 2.3 | 78.8 | 1.2 |
可待因 | 78.2 | 2.1 | 76.6 | 1.5 | 76.9 | 2.3 |
罌粟堿 | 89.3 | 1 | 95.7 | 0.8 | 90.6 | 0.5 |
那可丁 | 80.5 | 1.3 | 73.1 | 1 | 76.8 | 1.9 |
蒂巴因 | 76.8 | 0.7 | 81.9 | 1.1 | 83.3 | 1.3 |
表4可見，該方法的平均回收率為73.1%～95.7%，RSD為0.5%～2.3%。
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